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人胚腎細胞293T接收后要做這些處理

更新時間:2023-06-16 瀏覽次數(shù):2037

  人胚腎細胞293T是一種廣泛使用的細胞系,也被稱為HEK 293T或293 cells。它最初由Frank Graham和Alex van der Eb于1977年在荷蘭萊頓大學建立。
  這種細胞起源于人類的胚胎腎小管上皮細胞,因此能夠表達許多與腎功能相關(guān)的基因和蛋白質(zhì)。293T細胞株可以通過無血清培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)以及有限制性酶消化等方法進行傳代。
 
  一、人胚腎細胞293T接收后要做這些處理:
  1、收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
  2、在顯微鏡下確認人胚腎細胞293T生長狀態(tài)時,在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
  3、觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
  4、貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。
  5、懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基)。
  6、備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)人胚腎細胞293T,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后一次傳代建議1:2傳代。
 
  二、具有以下特點:
  1、高轉(zhuǎn)染效率:由于其雙倍體狀態(tài),在轉(zhuǎn)染時比單倍體細 胞更容易接受外源DNA并表達。
  2、容易獲取且穩(wěn)定:相較其他已知能夠支持多次分裂生長癌變標準株(如HeLa),293T不能連續(xù)無限度地 進行傳代,所以不存在惡性增殖的風險 ,但其仍然保持了高 度穩(wěn)定性。
  3、可應用于研究不同類型病毒感染機理:由于其廣泛應用 于原代細 胞 文化中作為對照組,而新出現(xiàn)的病毒往往沒有可靠 的細胞系可以進行繁殖,因此293T被用于在人類細 胞中表達和復 制不同類型的病毒。
  4、適合制備慢病毒載體:由于其能夠高效地產(chǎn)生包含重組基 因的慢 病 毒,所以被廣泛應用于基因傳遞工具之一。

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